Partículas Lentivirales de Activación (h) PAK5: sc-404073-LAC

PAK5 (quinasa 5 activada por p21; PAK7) es una quinasa de serina/treonina que actúa como efector aguas abajo de las GTPasas de la familia Rho, integrando la señalización de RAC1/CDC42 con la remodelación del citoesqueleto, la polaridad celular y las vías de respuesta al estrés. Regula la dinámica de la actina y procesos asociados a los microtúbulos que influyen en el crecimiento de neuritas, el tráfico vesicular y las señales de supervivencia, con conexiones descritas con la actividad de las redes MAPK y PI3K/AKT en contextos dependientes del tipo celular. La desregulación de la expresión o la señalización de PAK5 se ha asociado con cambios en la motilidad celular y fenotipos invasivos, y se ha estudiado en programas de señalización relevantes para la neurobiología y el cáncer. Estas propiedades hacen de PAK5 un objetivo útil para analizar cómo las quinasas impulsan la remodelación de la arquitectura celular y las respuestas transcripcionales en sistemas modelo humanos.

Las partículas de activación lentiviral PAK5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PAK5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PAK5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PAK5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PAK5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PAK5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.