Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) Paf1: sc-417797-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Paf1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Paf1 (h) y el plásmido de doble nickasa Paf1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PAF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Paf1 Anticuerpo (E-7): sc-514491
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Paf1 | sc-417797-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **PAF1** codifica **Paf1**, un componente central del complejo **PAF1** asociado a la ARN polimerasa II, que coordina la elongación de la transcripción con la regulación de la cromatina durante la transcripción. Mediante interacciones con factores de elongación y con la maquinaria de modificación de histonas, Paf1 ayuda a regular la monoubiquitinación de H2B y la metilación subsiguiente de H3K4/H3K79, vinculando la expresión génica con el estado epigenético. El complejo PAF1 también contribuye al procesamiento de ARN y a la estabilidad del genoma, incluidas funciones en los conflictos replicación–transcripción y en las respuestas al daño del ADN. La actividad desregulada del complejo PAF1 se ha asociado con programas transcripcionales alterados observados en múltiples cánceres y en otros contextos celulares proliferativos o relacionados con el estrés, lo que convierte a PAF1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la transcripción y la dinámica de la cromatina.
Paf1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PAF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PAF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PAF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PAF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.