Particules Lentivirales d'Activation (h2) PACE4: sc-405605-LAC-2

Le gène humain PCSK6 code la proprotéine convertase PACE4, une endoprotéase à sérine dépendante du calcium qui clive des protéines précurseurs sécrétées et présentes à la surface cellulaire au niveau de motifs comportant des résidus basiques afin de générer des facteurs matures et bioactifs. PACE4 contribue à l’activation post-traductionnelle de facteurs de croissance, de métalloprotéinases, de récepteurs et de protéines impliquées dans l’adhérence, reliant l’activité de PCSK6 au remodelage de la matrice extracellulaire, à la migration cellulaire et à des réseaux de signalisation du développement, notamment les voies associées à TGF-β/BMP. Une expression ou une activité dérégulée de PCSK6 a été associée à un traitement protéolytique anormal dans la biologie des cancers, au remodelage tissulaire lié à la fibrose et à des phénotypes cardiovasculaires, reflétant son rôle dans la régulation de la signalisation paracrine et des cascades de protéases. La perturbation de PCSK6/PACE4 est donc utilisée dans des études d’édition génomique et de génomique fonctionnelle afin d’examiner la maturation des substrats dépendante des convertases, la protéostasie de la voie sécrétoire et les modifications en aval des programmes d’invasion, de différenciation et des sorties de signalisation inflammatoire.

Les particules d'activation lentivirales PACE4 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PCSK6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PACE4 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PCSK6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PACE4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PCSK6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.