Plásmido Doble Nickase (m2) p73: sc-423511-NIC-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m2)p73 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa p73 (m2) y el plásmido de doble nickasa p73 (m22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Trp73. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p73 Anticuerpo (5B429): sc-56191
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m2) p73 | sc-423511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Trp73 del ratón codifica p73, un factor de transcripción de la familia p53 que regula programas que controlan la detención del ciclo celular, la apoptosis y la estabilidad genómica mediante la activación dependiente del contexto de genes diana implicados en las respuestas al daño del ADN. p73 también contribuye a procesos del desarrollo, incluida la neurogénesis y la diferenciación epitelial, y se integra con redes de señalización como la transcripción impulsada por E2F, la regulación asociada a TGF-β y las vías de quinasas activadas por estrés. La desregulación del equilibrio de isoformas de Trp73 y de la transcripción mediada por p73 se ha vinculado con una alteración de las funciones supresoras de tumores, inestabilidad cromosómica y defectos en la homeostasis tisular relevantes para la biología del cáncer y fenotipos del desarrollo. La edición genética de Trp73 en modelos murinos facilita estudios mecanísticos de la función específica de isoformas, los circuitos transcripcionales y las interacciones de vías que subyacen a las respuestas al estrés y a estados celulares asociados a enfermedad.
p73 El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trp73 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trp73. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trp73. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trp73 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.