Plásmido CRISPR de Activación (h) p55: sc-409649-ACT

El gen humano **MPP1** codifica la proteína de membrana palmitoilada **p55**, un factor andamiaje de la familia **MAGUK** que ayuda a organizar complejos proteicos asociados a la membrana y a acoplarlos al citoesqueleto cortical de **actina–espectrina**. p55 participa en la estabilidad de las uniones y en la arquitectura de los dominios de membrana mediante interacciones con proteínas con dominio **FERM** y otros adaptadores del citoesqueleto, influyendo en la forma celular, la polaridad y el tráfico intracelular. En eritrocitos, MPP1 contribuye a la integridad mecánica de la membrana y a la organización de microdominios especializados, procesos relevantes para la deformabilidad de los glóbulos rojos y para fenotipos de estabilidad de membrana. La alteración del andamiaje dependiente de p55 se ha investigado en contextos en los que el anclaje al citoesqueleto y la regulación de los contactos célula–célula están perturbados, lo que proporciona un marco para estudiar la organización de membrana en estados normales y asociados a enfermedad.

p55 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MPP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p55 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MPP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MPP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p55. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MPP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p55 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p55 en células tumorales con expresión de MPP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.