Plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA2 (h): sc-405566

Présentation

P4HA2 code la sous-unité catalytique alpha-2 de la prolyl-4-hydroxylase, une enzyme clé du réticulum endoplasmique indispensable à l’hydroxylation des résidus de proline dans le collagène et d’autres protéines de la matrice extracellulaire. Cette modification post-traductionnelle favorise le repliement correct et la stabilité de la triple hélice, reliant l’activité de P4HA2 à la biosynthèse du collagène, au contrôle qualité des protéines dans le RE et à l’organisation de la matrice extracellulaire. Par son rôle dans le dépôt et le remodelage de la matrice, P4HA2 est fréquemment étudié dans des voies liées aux interactions cellule–matrice, à la rigidité tissulaire et à la régulation du comportement cellulaire par le microenvironnement. Une expression dérégulée de P4HA2 a été associée au remodelage fibrotique et à des modifications du stroma associé aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P4HA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P4HA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P4HA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P4HA2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P4HA2 pour l'étude de la signalisation de P4HA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P4HA2 essentiels à la fonction de P4HA2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P4HA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P4HA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P4HA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P4HA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P4HA2 plasmide HDR (h) et le P4HA2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P4HA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P4HA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.