P2Y11 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405745

Descripción general

P2RY11 codifica el receptor humano P2Y11, un receptor acoplado a proteína G sensible a ATP/UTP que, de forma singular, se acopla tanto a la señalización mediada por Gq como por Gs. Tras la estimulación por nucleótidos extracelulares, P2Y11 promueve la activación de la fosfolipasa C con movilización de Ca²⁺ intracelular y aumenta el cAMP, integrando señales purinérgicas con vías MAPK/ERK y otros sistemas de segundos mensajeros que modulan la activación de células inmunitarias y los programas de citocinas. P2Y11 se expresa en múltiples poblaciones de leucocitos y se ha implicado en la regulación de respuestas de células dendríticas, monocitos y linfocitos T en microambientes inflamatorios. La señalización purinérgica desregulada que involucra a P2Y11 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes, lo que respalda su estudio en modelos de inmunometabolismo, neuroinflamación e interacciones tumor–sistema inmune.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y11 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P2RY11 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P2RY11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P2RY11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y11.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P2RY11 para la investigación de la señalización de P2Y11, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P2RY11 críticos para la función de P2Y11
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P2RY11 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P2Y11 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P2Y11 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P2RY11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y11 (h) y el plásmido HDR P2Y11 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P2RY11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P2RY11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.