OX2R CRISPR Activation Plasmid (m): sc-425439-ACT

Das Mausgen *Cd200r1* kodiert OX2R (CD200-Rezeptor 1), einen inhibitorischen, immunregulatorischen Rezeptor, der überwiegend von Zellen der myeloischen Linie exprimiert wird, darunter Makrophagen, dendritische Zellen und Mikroglia. Die Bindung von OX2R an seinen Liganden CD200 fördert eine ITIM-abhängige Signalübertragung, die Phosphatasen wie SHP-1/2 rekrutiert, um proinflammatorische Kaskaden abzuschwächen und dadurch die Zytokinproduktion, die Aktivierung von Phagozyten sowie antigenpräsentierende Funktionen zu begrenzen. Über diese Signalwege trägt *Cd200r1* zur Aufrechterhaltung der Immuntoleranz und der Gewebehomöostase an Barriereoberflächen und im zentralen Nervensystem bei. Eine Fehlregulation der CD200–OX2R-Signalgebung wurde in Modellen für Neuroinflammation, Autoimmunität, infektionsassoziierte Immunpathologie und tumorbedingte Immunflucht beschrieben und macht diesen Signalweg zu einem nützlichen Ansatzpunkt zur Untersuchung der Checkpoint-Biologie myeloischer Zellen.

OX2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cd200r1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OX2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cd200r1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cd200r1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OX2R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cd200r1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OX2R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OX2R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cd200r1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.