Plasmide CRISPR/Cas9 KO osteocalcin (h): sc-400299

Présentation

BGLAP code l’ostéocalcine, une protéine sécrétée non collagénique dépendante de la vitamine K, produite par les ostéoblastes et déposée dans la matrice extracellulaire osseuse, où elle constitue un marqueur clé de la différenciation ostéogénique. L’ostéocalcine se lie à l’hydroxyapatite et contribue à la maturation minérale ainsi qu’à l’homéostasie du calcium, reliant les programmes de formation osseuse à l’organisation de la matrice extracellulaire. Son expression est coordonnée avec les réseaux régulateurs des ostéoblastes, notamment la différenciation pilotée par RUNX2 et les voies de signalisation qui couplent le remodelage osseux à la communication ostéoclaste–ostéoblaste. Les altérations de la régulation de BGLAP/de l’ostéocalcine sont fréquemment étudiées dans le contexte des phénotypes de renouvellement osseux, des troubles de la minéralisation du squelette et des interactions entre tumeurs et microenvironnement osseux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO osteocalcin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BGLAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BGLAP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BGLAP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine osteocalcin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BGLAP pour l'étude de la signalisation de osteocalcin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BGLAP essentiels à la fonction de osteocalcin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BGLAP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le osteocalcin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le osteocalcin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BGLAP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le osteocalcin plasmide HDR (h) et le osteocalcin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BGLAP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BGLAP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.