Plasmide Double Nickase (h) Orexin-A: sc-400357-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Orexin-A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Orexin-A Double Nickase (h) et le plasmide Orexin-A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HCRT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Orexin-A Antibody (KK09): sc-80263
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Orexin-A | sc-400357-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Orexin-A | sc-400357-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCRT code la prépro‑orexine, qui est clivée par protéolyse pour produire l’orexine‑A, un neuropeptide principalement synthétisé par des neurones de l’hypothalamus qui coordonnent l’éveil, la stabilité du cycle veille–sommeil, l’homéostasie énergétique et les comportements motivés. L’orexine‑A signale via les récepteurs couplés aux protéines G OX1R et OX2R, activant des flux de Ca²⁺ ainsi que les voies MAPK/ERK et AMPc/PKA, et modulant la libération de neurotransmetteurs au sein des circuits monoaminergiques et cholinergiques. Ce réseau de signalisation influence l’alimentation et la réactivité au stress par l’intégration, au niveau de l’hypothalamus et du tronc cérébral, d’indices métaboliques et circadiens. Une altération du tonus HCRT/orexine a été impliquée dans des troubles du cycle veille–sommeil, des phénotypes associés à l’obésité et des manifestations neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation des circuits neuronaux.
Orexin-A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HCRT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HCRT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HCRT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HCRT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.