Plasmide CRISPR/Cas9 KO Oma1 (h): sc-402953

Présentation

OMA1 code une métalloprotéase activée par le stress, enchâssée dans la membrane interne mitochondriale, qui contribue au contrôle qualité des mitochondries en clivant protéolytiquement des substrats tels qu’OPA1 afin de remodeler l’architecture des crêtes et de réguler la dynamique fusion–fission mitochondriale. L’activité d’Oma1 est induite par la dépolarisation mitochondriale et le stress protéotoxique, intégrant des signaux qui influencent l’efficacité de la phosphorylation oxydative, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la surveillance liée à la mitophagie. Par son impact sur la morphologie de l’organite et la bioénergétique, OMA1 est étudiée dans des voies qui gouvernent la susceptibilité à l’apoptose et l’adaptation métabolique. Un dysfonctionnement de l’axe OMA1–OPA1 a été associé à des phénotypes de dysfonction mitochondriale pertinents pour la neurodégénérescence, le stress cardiométabolique et d’autres troubles dans lesquels une altération de la dynamique mitochondriale est impliquée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Oma1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OMA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OMA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OMA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Oma1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OMA1 pour l'étude de la signalisation de Oma1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OMA1 essentiels à la fonction de Oma1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OMA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Oma1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Oma1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OMA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Oma1 plasmide HDR (h) et le Oma1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OMA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OMA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.