Partículas Lentivirales de Activación (m) Olfr303: sc-434741-LAC

Olfr303 codifica un receptor olfativo en el ratón que pertenece a la familia de GPCR de clase A tipo rodopsina y se predice que acopla la unión de odorantes a la señalización mediada por proteínas G heterotriméricas. Tras su activación, los receptores olfativos suelen desencadenar cascadas de transducción mediadas por AMPc que regulan canales iónicos activados por nucleótidos cíclicos y respuestas neuronales posteriores dependientes de calcio, moldeando la codificación sensorial y las respuestas conductuales. Aunque Olfr303 se estudia principalmente en el contexto del olfato, la expresión ectópica de receptores olfativos en tejidos no olfativos se ha asociado con procesos más amplios regulados por GPCR, incluida la modulación de estados de señalización celular y respuestas tipo quimiotaxis. Estas características hacen que Olfr303 sea relevante para investigar la lógica de la señalización de GPCR, la biología de las neuronas sensoriales y los flujos de trabajo de desorfanización de receptores.

Las partículas de activación lentiviral Olfr303 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Olfr303 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Olfr303 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Olfr303, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Olfr303. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Olfr303 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.