Plásmido CRISPR de Activación (h) OIP5: sc-409486-ACT

OIP5 (proteína 5 que interactúa con Opa) es un regulador conservado del ciclo celular, enriquecido en los centrómeros y estrechamente vinculado a la segregación cromosómica y la progresión mitótica. Contribuye a la función del cinetocoro/centrómero y favorece el ensamblaje adecuado del huso mitótico, lo que sitúa la actividad de OIP5 dentro de las redes centrales de control de la mitosis que protegen la estabilidad genómica. La expresión desregulada de OIP5 se ha asociado con estados proliferativos y se estudia con frecuencia en el contexto de la aneuploidía, la inestabilidad cromosómica y la biología del cáncer. Como factor ligado a la proliferación, OIP5 también se utiliza como punto de entrada molecular para investigar programas transcripcionales dependientes del ciclo celular y la regulación del punto de control mitótico en células humanas.

OIP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OIP5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OIP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OIP5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OIP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OIP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OIP5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OIP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OIP5 en células tumorales con expresión de OIP5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.