Plasmide CRISPR/Cas9 KO OIP106 (h): sc-406170

Présentation

TRAK1 code pour OIP106, un adaptateur cytoplasmique impliqué dans l’organisation du transport intracellulaire en reliant des cargos à des complexes moteurs dépendants des microtubules. OIP106 a été associé au trafic et au positionnement des mitochondries, des processus qui influencent la polarité neuronale, le transport axonal et la bioénergétique cellulaire. Par ces fonctions, TRAK1 est étudié dans des voies qui régissent la dynamique des organites, l’organisation du cytosquelette et les réponses au stress, lesquelles façonnent la survie et la différenciation cellulaires. La dérégulation du transport des organites et de la distribution mitochondriale est pertinente pour la recherche sur les mécanismes des maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, ainsi que d’autres troubles caractérisés par une altération de l’énergétique cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OIP106 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRAK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRAK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRAK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OIP106.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRAK1 pour l'étude de la signalisation de OIP106, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRAK1 essentiels à la fonction de OIP106
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRAK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OIP106 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OIP106 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRAK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OIP106 plasmide HDR (h) et le OIP106 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRAK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRAK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.