ODR4 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-417633-LAC-2

Das humane Gen C1orf27 kodiert ODR4, ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Transmembranprotein, das an der Biosynthese, Faltung und dem Transport G‑Protein‑gekoppelter Rezeptoren (GPCR) sowie weiterer Clients des sekretorischen Weges beteiligt ist. ODR4 trägt zur Qualitätskontrolle im ER und zur Proteostase bei, indem es die Rezeptorreifung und die Lieferung an die Zelloberfläche beeinflusst, und ist damit mit zellulären Prozessen wie der Funktionsfähigkeit der GPCR‑Signalübertragung sowie stressresponsiven Signalwegen einschließlich der unfolded protein response (UPR) verknüpft. Eine dysregulierte ODR4‑Funktion oder -Expression wurde in der Literatur mit einer veränderten Rezeptorhomöostase in Verbindung gebracht und in Kontexten untersucht, in denen GPCR‑ und ER‑Stress‑Netzwerke gestört sind, unter anderem in krebs- und neurobiologisch relevanten Modellen. Die Geneditierung von C1orf27 stellt einen praktikablen Ansatz dar, um ER‑Transportmechanismen zu untersuchen, Rezeptor‑Interaktome zu kartieren und isogene Zellsysteme für funktionelle Genomikstudien zur Regulation des sekretorischen Weges zu erstellen.

ODR4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente C1orf27-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ODR4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der C1orf27-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ODR4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen C1orf27-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.