OCT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402053-ACT

SLC22A2 kodiert den organischen Kationentransporter 2 (OCT2), einen polyspezifischen Solute-Carrier, der die elektrogene Aufnahme endogener Amine und xenobiotischer organischer Kationen über die Plasmamembran vermittelt. Beim Menschen ist OCT2 besonders für den Transport im proximalen Nierentubulus relevant, wo er zur gerichteten Sekretion und zur zellulären Exposition gegenüber transportierten Verbindungen beiträgt und damit die intrazelluläre Verteilung sowie mitochondriale bzw. oxidative Stressantworten beeinflusst. Die OCT2-Aktivität ist zudem in übergeordnete Entgiftungs- und pharmakokinetische Netzwerke eingebunden, indem sie die Substratverfügbarkeit für Phase-I/II-Metabolismus und Efflux-Transporter moduliert. Variationen oder eine Dysregulation von SLC22A2 wurden mit interindividuellen Unterschieden in der Arzneistoffhandhabung und der Anfälligkeit für transporter-vermittelte Toxizitäten in Verbindung gebracht, was es zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien in der Nieren- und Epithelbiologie macht.

OCT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC22A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OCT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC22A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC22A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OCT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC22A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OCT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OCT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC22A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.