Plásmido CRISPR de Activación (h) OC-2: sc-404081-ACT

ONECUT2 (OC-2) codifica un factor de transcripción homeobox que regula la especificación de linaje y los programas de diferenciación, particularmente en contextos endodérmicos y epiteliales. Como regulador de unión al ADN, OC-2 coordina redes transcripcionales que controlan la identidad celular, la proliferación y la organización del patrón del desarrollo, interactuando con una maquinaria más amplia de cromatina y de transcripción. La expresión desregulada de ONECUT2 se ha relacionado con estados de expresión génica alterados asociados a fenotipos oncogénicos, incluidos cambios en el control del crecimiento, programas vinculados a la invasión y la plasticidad celular. Estas propiedades hacen de ONECUT2 una diana útil para estudiar los circuitos transcripcionales, la regulación epigenética y las transiciones de estado relevantes para la enfermedad en modelos celulares humanos.

OC-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ONECUT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OC-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ONECUT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ONECUT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OC-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ONECUT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OC-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OC-2 en células tumorales con expresión de ONECUT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.