Plasmide Double Nickase (h) Ob-R/Leptin Receptor: sc-400315-NIC

LEPR code Ob-R, le récepteur de la leptine, un récepteur de cytokines de classe I qui assure le contrôle, dépendant de la leptine, de l’équilibre énergétique, de la fonction neuroendocrinienne et de l’homéostasie métabolique. La liaison du ligand favorise l’activation de JAK2 associée au récepteur et la signalisation en aval via STAT3/STAT5, avec un couplage supplémentaire aux voies PI3K–AKT et MAPK, qui influencent les programmes transcriptionnels, l’excitabilité cellulaire et la détection des nutriments. La signalisation de LEPR s’articule également avec une rétroaction négative médiée par SOCS3 et avec des médiateurs inflammatoires qui modulent les réponses hypothalamiques et périphériques aux signaux d’adiposité. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de LEPR sont étroitement liées à des phénotypes associés à l’obésité et à une dysrégulation métabolique, et font l’objet de nombreuses études dans des modèles pertinents pour le tissu adipeux, le système immunitaire et le SNC.

Ob-R/Leptin Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LEPR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LEPR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LEPR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LEPR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.