Plasmide CRISPR/Cas9 KO OATP-F (h): sc-405736

Présentation

SLCO1C1 code la protéine humaine de transport des anions organiques de type polypeptide OATP-F (OATP1C1), un transporteur membranaire de la famille des SLC qui assure une captation des hormones thyroïdiennes et des iodothyronines apparentées indépendante du sodium, avec une forte affinité pour la thyroxine (T4) et la triiodothyronine inverse (rT3). Ce transporteur joue un rôle majeur dans le contrôle de la disponibilité hormonale au niveau des barrières tissulaires, notamment la barrière hémato-encéphalique, influençant ainsi l’homéostasie locale des hormones thyroïdiennes et les programmes transcriptionnels en aval régulés par les récepteurs des hormones thyroïdiennes. En modulant les flux intracellulaires d’iodothyronines, OATP-F s’inscrit à l’interface entre la signalisation endocrine, la régulation métabolique et les voies de prise en charge des xénobiotiques qui dépendent d’un accès contrôlé des substrats via des transporteurs. Des altérations de l’activité ou de l’expression de ce transporteur sont pertinentes pour la recherche sur la régulation neuroendocrinienne et sur les troubles liés à une distribution et une signalisation des hormones thyroïdiennes perturbées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OATP-F (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLCO1C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLCO1C1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLCO1C1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OATP-F.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLCO1C1 pour l'étude de la signalisation de OATP-F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLCO1C1 essentiels à la fonction de OATP-F
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLCO1C1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OATP-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OATP-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLCO1C1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OATP-F plasmide HDR (h) et le OATP-F (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLCO1C1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLCO1C1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.