Plasmide CRISPR d'Activation (h) OATP-C: sc-402898-ACT

SLCO1B1 code le polypeptide humain de transport des anions organiques OATP‑C (OATP1B1), un transporteur d’absorption multisubstrat enrichi dans les hépatocytes, qui assure une entrée indépendante du sodium des acides biliaires, des conjugués de bilirubine, des métabolites d’hormones stéroïdiennes, des hormones thyroïdiennes et de divers xénobiotiques. En contrôlant l’importation sinusoidale dans les cellules hépatiques, OATP‑C influence la clairance hépatique, le recyclage entérohépatique et l’exposition systémique aux métabolites endogènes et aux substrats de petites molécules. L’activité de SLCO1B1 s’inscrit à l’interface des voies de détoxification et de métabolisme coordonnées avec les enzymes de phase I/II et les transporteurs d’efflux ABC, façonnant les interactions transporteur–enzyme au sein des réseaux pharmacocinétiques. La variation génétique ou une expression dérégulée est associée à des modifications du devenir des médicaments et à une susceptibilité accrue aux effets indésirables médiés par les transporteurs, et fait l’objet d’études dans le contexte de la fonction hépatique, de l’hyperbilirubinémie et des mécanismes d’interactions médicamenteuses.

OATP-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLCO1B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OATP-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLCO1B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLCO1B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OATP-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLCO1B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OATP-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OATP-C dans les cellules tumorales présentant une expression de SLCO1B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.