Plásmido CRISPR de Activación (h) OAT2: sc-403923-ACT

SLC22A7 codifica el transportador humano de aniones orgánicos 2 (OAT2), un transportador de solutos polispecífico que media la captación celular y el intercambio de aniones orgánicos endógenos y metabolitos xenobióticos. La actividad de OAT2 contribuye al manejo hepático y renal de moléculas pequeñas, influyendo en el balance intracelular de aniones y acoplándose a procesos metabólicos y de desintoxicación mediante redes coordinadas de transportadores. Al modular la exposición celular a compuestos tipo fármaco y a intermediarios metabólicos, OAT2 es relevante para estudios de farmacocinética, disposición de fármacos mediada por transportadores y variabilidad en la sensibilidad química específica de cada tejido. Por ello, la expresión o la función desregulada del transportador resulta de interés en investigaciones mecanísticas sobre la fisiología del hígado y el riñón y sobre alteraciones asociadas a enfermedad en las vías de depuración de xenobióticos.

OAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC22A7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC22A7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC22A7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OAT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC22A7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OAT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OAT2 en células tumorales con expresión de SLC22A7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.