Plasmide CRISPR d'Activation (h) OAT1: sc-404284-ACT

Le gène humain **SLC22A6** code le transporteur d’anions organiques 1 (**OAT1**), un transporteur basolatéral du tubule proximal rénal qui assure l’entrée, depuis le sang vers les cellules épithéliales, de métabolites endogènes et d’anions organiques xénobiotiques. OAT1 agit au sein de réseaux de transporteurs de la famille *solute carrier* qui couplent l’échange d’anions organiques à la gestion cellulaire de l’urate, des toxines urémiques et des conjugués de médicaments, influençant ainsi la sécrétion rénale et la clairance systémique. En modulant l’exposition intracellulaire aux métabolites et aux produits pharmaceutiques, l’activité de SLC22A6 interfère avec des voies liées aux réponses au stress tubulaire et à la toxicologie dépendante du transport. Une expression ou une fonction altérée d’OAT1 a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des variations de la disposition des médicaments et à une susceptibilité accrue à des effets indésirables rénaux, ce qui souligne sa pertinence pour la néphrologie et la recherche pharmacocinétique.

OAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC22A6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC22A6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC22A6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC22A6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC22A6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.