Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nurr1: sc-400289-ACT

NR4A2 code le récepteur nucléaire orphelin Nurr1, un facteur de transcription qui régule des programmes géniques contrôlant la différenciation neuronale, l’homéostasie mitochondriale et la signalisation anti‑inflammatoire. Nurr1 est un déterminant clé du développement et du maintien des neurones dopaminergiques, en coordonnant des réseaux transcriptionnels impliqués dans la synthèse de la dopamine, le transport vésiculaire et les voies de réponse au stress. Il s’articule avec la signalisation des récepteurs nucléaires et les processus de régulation de la chromatine pour moduler le destin cellulaire et la survie en conditions de stress inflammatoire ou oxydatif. Une activité dérégulée de NR4A2/Nurr1 a été associée à la neurodégénérescence et à une activation immunitaire altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies liées à la maladie de Parkinson et des phénotypes neuro‑inflammatoires.

Nurr1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR4A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nurr1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR4A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR4A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nurr1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR4A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nurr1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nurr1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR4A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.