Nur77 Double Nickase Plasmid (m): sc-420884-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nur77 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nur77 Double-Nickase-Plasmid (m) und Nur77 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nr4a1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nur77: sc-365113
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nur77 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420884-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nur77 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420884-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Nr4a1** kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor **Nur77 (NR4A1)**, einen Immediate‑Early-Transkriptionsfaktor, der Signale aus der Aktivierung des T‑Zell‑Rezeptors, MAPK‑Kaskaden und NF‑κB‑gekoppelten Entzündungsprogrammen integriert. Nur77 reguliert Gen-Netzwerke, die die negative Selektion von Thymozyten, periphere T‑Zell‑Anergie, Makrophagen-Polarisation und metabolische Anpassung steuern, mit kontextabhängigen Effekten auf Apoptose- und mitochondriale Signalwege. Im Nervensystem wird es durch neuronale Aktivität und Stresshormone rasch induziert und verknüpft calciumabhängige Signalübertragung mit transkriptionellen Antworten. Eine fehlregulierte NR4A1‑Signalgebung wurde in Modellen von Autoimmunität und chronischer Entzündung, Atherosklerose, Überlebensprogrammen von Krebszellen sowie neuroinflammatorischen und neurodegenerativen Prozessen in Verbindung gebracht.
Nur77 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nr4a1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nr4a1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nr4a1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nr4a1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.