nucleobindin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405167

Descripción general

NUCB1 codifica la nucleobindina, una proteína de unión al calcio que se localiza en la vía secretora y participa en la regulación dependiente de Ca2+ del tráfico intracelular y la clasificación de proteínas. A través de motivos tipo EF-hand y de interacciones con la carga luminal, NUCB1 se ha relacionado con la homeostasis del Golgi y del retículo endoplásmico (RE), el transporte mediado por vesículas y respuestas secretoras adaptativas al estrés. Se ha informado de una expresión alterada de NUCB1 en distintos contextos que implican proteostasis desregulada y señalización de estrés celular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la secreción, la dinámica de membranas y las vías reguladas por Ca2+. Los procesos dependientes de NUCB1 también se investigan en modelos de enfermedad en los que la secreción, la agregación o las respuestas al estrés de los orgánulos contribuyen a la fisiopatología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO nucleobindin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NUCB1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NUCB1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NUCB1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína nucleobindin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NUCB1 para la investigación de la señalización de nucleobindin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NUCB1 críticos para la función de nucleobindin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NUCB1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido nucleobindin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido nucleobindin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NUCB1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR nucleobindin (h) y el plásmido HDR nucleobindin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NUCB1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NUCB1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.