Plásmido Doble Nickase (h) NTR1: sc-402552-NIC

NTSR1 codifica el receptor 1 de neurotensina (NTR1), un GPCR de clase A que se une al neuropéptido neurotensina para regular la señalización intracelular mediante la movilización de Ca²⁺ impulsada por Gαq/PLCβ y la activación de PKC, con acoplamiento adicional a MAPK/ERK y al tráfico mediado por β-arrestina. NTR1 influye en la neurotransmisión, la contracción del músculo liso y los procesos secretores a través de la desensibilización e internalización del receptor, y del “cross-talk” con otras vías de GPCR. Las alteraciones en la expresión y la señalización de NTSR1 se han asociado con programas proliferativos e inflamatorios desregulados en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la dinámica de la señalización por GPCR. Como receptor de membrana con endocitosis rápida inducida por ligando, NTR1 también se utiliza ampliamente para investigar la farmacología del receptor, la señalización compartimentalizada y las respuestas transcripcionales aguas abajo.

NTR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NTSR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NTSR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NTSR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NTSR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.