Plasmide CRISPR/Cas9 KO NT-4 (h): sc-402291

Présentation

Le gène humain **NTF4** code la neurotrophine-4 (NT-4), un facteur de croissance sécrété de la famille des neurotrophines qui signale principalement via le récepteur TrkB (NTRK2) pour activer les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ. NT-4 favorise la survie neuronale, la croissance des neurites, la plasticité synaptique et le maintien des circuits dépendant de l’activité, avec des rôles supplémentaires rapportés dans les systèmes sensoriels et l’innervation périphérique. Une dérégulation de la signalisation neurotrophine–TrkB est impliquée dans la neurodégénérescence, des phénotypes neurodéveloppementaux et des altérations de la fonction synaptique, faisant de **NTF4** une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la connectivité neuronale et le soutien trophique. L’expression de **NTF4** et l’activité de la voie NT-4/TrkB sont également étudiées dans des modèles de réponse aux lésions et de remodelage cellulaire lié au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NT-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NTF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NTF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NTF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NT-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NTF4 pour l'étude de la signalisation de NT-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NTF4 essentiels à la fonction de NT-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NTF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NT-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NT-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NTF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NT-4 plasmide HDR (h) et le NT-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NTF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NTF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.