Plasmide Double Nickase (h) NSD3: sc-402721-NIC

NSD3 (WHSC1L1) code une histone-lysine méthyltransférase contenant un domaine SET, qui régule l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle via la méthylation de l’histone H3 et la coordination de complexes épigénétiques « lecteurs/scripteurs ». En modulant l’état des enhancers et des promoteurs, NSD3 influence des programmes fondamentaux contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses aux dommages de l’ADN, et s’inscrit dans des processus plus larges de remodelage de la chromatine et d’élongation transcriptionnelle. Une activité ou un dosage altérés de NSD3 ont été associés à une dérégulation de l’expression génique dans des contextes oncogéniques, notamment dans des tumeurs où l’amplification de 8p11 et la reprogrammation épigénétique sont marquées, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des mécanismes pathologiques pilotés par la chromatine.

NSD3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NSD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NSD3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NSD3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NSD3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.