Plasmide CRISPR/Cas9 KO NRF-1 (m): sc-421961

Présentation

La Nrf1 murine (NRF-1) code un facteur de transcription qui coordonne le contrôle nucléaire de la biogenèse mitochondriale et de la fonction respiratoire en régulant des gènes impliqués dans la phosphorylation oxydative, la machinerie de transcription/réplication de l’ADN mitochondrial et le métabolisme énergétique cellulaire. NRF-1 intègre les signaux nutritionnels et ceux des facteurs de croissance à la progression du cycle cellulaire et à l’homéostasie rédox, en soutenant la protéostasie et les réponses adaptatives au stress métabolique. La dérégulation des programmes transcriptionnels dépendants de NRF-1 a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une altération de la fonction mitochondriale et à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctionnements cardiométaboliques et la reprogrammation métabolique associée au cancer. En tant que nœud central du dialogue mitochondrie–noyau, NRF-1 est fréquemment étudié dans les voies qui gouvernent la bioénergétique, la gestion des ROS et les réseaux transcriptionnels qui façonnent la différenciation et la résistance au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NRF-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nrf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nrf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nrf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NRF-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nrf1 pour l'étude de la signalisation de NRF-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nrf1 essentiels à la fonction de NRF-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nrf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NRF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NRF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nrf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NRF-1 plasmide HDR (m) et le NRF-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nrf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nrf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.