NRAMP 1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421957-LAC

Slc11a1 kodiert NRAMP1, einen Transporter für zweiwertige Metallionen, der vorwiegend an phagosomalen und lysosomalen Membranen in Makrophagen und anderen myeloischen Zellen lokalisiert ist. Durch die Regulierung des Fe²⁺- und Mn²⁺-Flusses innerhalb des Phagosoms beeinflusst NRAMP1 antimikrobielle Effektorfunktionen, oxidativen und nitrosativen Stress sowie nachgelagerte inflammatorische Signalprogramme. Diese Aktivität verknüpft Slc11a1 mit angeborenen Immunwegen, die die Pathogenrestriktion, die Antigenverarbeitung und die Polarisation von Makrophagen steuern. Genetische Variation oder eine veränderte Expression von NRAMP1 wird umfassend hinsichtlich ihres Einflusses auf die Anfälligkeit in Modellen intrazellulärer Infektionen sowie auf entzündungsassoziierte Phänotypen untersucht, die für Immunmetabolismus und Wirt-Pathogen-Interaktionen relevant sind.

NRAMP 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Slc11a1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NRAMP 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Slc11a1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NRAMP 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Slc11a1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.