NR3B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406162

Descripción general

GRIN3B codifica la subunidad NR3B de los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA), una clase de receptores glutamatérgicos ionotrópicos que regulan la transmisión sináptica excitadora y la señalización dependiente de Ca²⁺ en el sistema nervioso central. La incorporación de subunidades de la familia NR3 puede modificar la biofísica del receptor, incluida la sensibilidad a los agonistas y las propiedades del canal, ajustando así la plasticidad sináptica y la regulación génica dependiente de la actividad. La modulación de la señalización glutamatérgica vinculada a GRIN3B se cruza con vías que controlan el desarrollo neuronal, el refinamiento de circuitos y la homeostasis del calcio. La disfunción de los receptores NMDA es relevante para estudios de fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, respuestas al estrés excitotóxico y mecanismos de conectividad sináptica alterada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NR3B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRIN3B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRIN3B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRIN3B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NR3B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRIN3B para la investigación de la señalización de NR3B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRIN3B críticos para la función de NR3B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRIN3B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NR3B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NR3B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRIN3B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NR3B (h) y el plásmido HDR NR3B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRIN3B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRIN3B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.