NR3A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403378

Descripción general

GRIN3A codifica la subunidad humana NR3A de los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA), un complejo de canales iónicos activado por glutamato que modula la transmisión sináptica y la excitabilidad neuronal. La incorporación de NR3A en los receptores NMDA altera las propiedades del canal, incluida una menor permeabilidad al Ca2+ y un bloqueo por Mg2+ modificado, influyendo así en la remodelación sináptica y la plasticidad dependientes de la actividad. La expresión de GRIN3A está regulada durante el desarrollo y se ha implicado en procesos como el equilibrio excitatorio/inhibitorio, la maduración dendrítica y el refinamiento de circuitos. La desregulación de la composición de subunidades de los receptores NMDA, incluidos cambios en los niveles de NR3A, se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la señalización sináptica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NR3A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRIN3A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRIN3A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRIN3A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NR3A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRIN3A para la investigación de la señalización de NR3A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRIN3A críticos para la función de NR3A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRIN3A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NR3A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NR3A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRIN3A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NR3A (h) y el plásmido HDR NR3A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRIN3A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRIN3A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.