Plásmido CRISPR de Activación (m) NR2E1: sc-423422-ACT

Nr2e1 codifica NR2E1 (TLX), un factor de transcripción receptor nuclear huérfano que mantiene la autorrenovación de las células madre neurales y de las células progenitoras, y regula el equilibrio entre proliferación y diferenciación durante el desarrollo del prosencéfalo. NR2E1 integra programas transcripcionales que gobiernan la progresión del ciclo celular, la neurogénesis y la represión génica dependiente de la cromatina, influyendo en el patrón cortical y el desarrollo de la retina. En modelos murinos, la actividad alterada de Nr2e1 se asocia con fenotipos del neurodesarrollo que afectan la estructura cerebral y el comportamiento, lo que respalda su relevancia en vías que controlan la especificación de linajes neurales. Por ello, este gen se utiliza ampliamente para investigar redes reguladoras subyacentes al mantenimiento de células madre, la maduración neuronal y el control transcripcional específico de tejido.

NR2E1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nr2e1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NR2E1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nr2e1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nr2e1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NR2E1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nr2e1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NR2E1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NR2E1 en células tumorales con expresión de Nr2e1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.