Plasmide CRISPR d'Activation (m) NQO1: sc-421913-ACT

Le gène murin Nqo1 code la NAD(P)H quinone déshydrogénase 1 (NQO1), une flavoprotéine cytosolique qui catalyse la réduction à deux électrons des quinones en hydroquinones, limitant ainsi le cycle rédox et la production d’espèces réactives de l’oxygène. NQO1 agit en aval des voies de signalisation du stress oxydant et électrophile et est couramment régulée dans le cadre des programmes de réponse antioxydante et de métabolisme des xénobiotiques pilotés par NRF2. En modulant l’homéostasie rédox cellulaire, la capacité de détoxification et la protéostasie, NQO1 influence la susceptibilité aux lésions oxydatives et aux phénotypes de stress métabolique. Des altérations de l’activité de Nqo1/NQO1 sont fréquemment étudiées dans des modèles de carcinogenèse, d’inflammation, de neurodégénérescence et de dysfonction cardiométabolique, où le déséquilibre rédox et la gestion des électrophiles constituent des mécanismes centraux.

NQO1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nqo1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NQO1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nqo1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nqo1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NQO1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nqo1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NQO1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NQO1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nqo1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.