Plasmide Double Nickase (h) Npl4: sc-403787-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Npl4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Npl4 Double Nickase (h) et le plasmide Npl4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NPLOC4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Npl4 Antibody (D-1): sc-365796
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Npl4 | sc-403787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Npl4 | sc-403787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NPLOC4 code pour Npl4, un cofacteur essentiel du complexe ATPase AAA+ p97/VCP, qui reconnaît les substrats polyubiquitinylés et couple leur extraction dépendante de l’ubiquitine à leur dégradation par le protéasome. Par son rôle dans la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), le contrôle qualité associé aux ribosomes et le renouvellement des protéines associées à la chromatine, Npl4 contribue au maintien de la protéostasie en situation de stress cellulaire et soutient la stabilité du génome. La perturbation de l’axe p97–UFD1–Npl4 dérègle la signalisation de l’ubiquitine et peut modifier les réponses au stress protéotoxique, aux exigences de réparation de l’ADN et à la progression du cycle cellulaire, faisant de NPLOC4 un nœud utile pour l’étude des réseaux de contrôle qualité des protéines. Une régulation aberrante de cette voie a été associée, dans des systèmes expérimentaux, à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence et le cancer, via des effets sur l’homéostasie protéique et la signalisation d’adaptation au stress.
Npl4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NPLOC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NPLOC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NPLOC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NPLOC4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.