Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
NPC1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421941-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NPC1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase NPC1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase NPC1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Npc1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NPC1 Anticorpo (G-1): sc-271335
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NPC1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-421941-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NPC1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-421941-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Npc1 de camundongo codifica a NPC1, uma proteína de membrana lisossomal de múltiplas passagens que coopera com a NPC2 para mobilizar colesterol não esterificado e outros lipídios de endossomos tardios/lisossomos para as membranas celulares. Ao regular o tráfego intracelular de esteróis, a NPC1 influencia a homeostase do colesterol, a função lisossomal e vias de sinalização metabólica a jusante que dependem de uma composição lipídica adequada das membranas. A interrupção da atividade da NPC1 leva ao acúmulo de lipídios nos lisossomos e a perturbações amplas no transporte endolisossomal e em processos associados à autofagia. Assim, o Npc1 é amplamente utilizado como ponto de entrada genético para modelar fenótipos de armazenamento lipídico e para dissecar mecanismos de regulação metabólica centrados no lisossomo em células de camundongo.
NPC1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Npc1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Npc1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Npc1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Npc1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.