Notum Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429545

Descripción general

Notum codifica una carboxilesterasa secretada que atenúa la señalización Wnt al desacetilar el grupo palmitoleato de los ligandos Wnt, reduciendo así la interacción ligando–receptor y la transcripción dependiente de β-catenina aguas abajo. En el ratón, NOTUM contribuye a la regulación del patrón embrionario, la homeostasis tisular y la actividad del nicho de células madre mediante la modulación de la señalización canónica Wnt/Frizzled–LRP. La alteración de la actividad de NOTUM se ha vinculado con una salida desregulada de la vía Wnt en contextos como la remodelación ósea, la dinámica del epitelio intestinal y los procesos del neurodesarrollo. Como freno de la vía Wnt, Notum se estudia con frecuencia en la regulación por retroalimentación de la vía y en el control microambiental de la proliferación y la diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Notum (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Notum en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Notum junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Notum tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Notum.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Notum para la investigación de la señalización de Notum, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Notum críticos para la función de Notum
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Notum para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Notum CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Notum CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Notum. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Notum (m) y el plásmido HDR Notum (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Notum para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Notum definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.