Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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Notch 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421933
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Notch 3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Notch 3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Notch 3 Anticorpo (A-6): sc-515825
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Notch 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421933 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Notch3 codifica o recetor Notch 3, uma proteína transmembranar de passagem única que medeia a sinalização juxtácrina para controlar decisões de destino celular, proliferação e diferenciação de forma dependente do contexto. Após a ligação do ligando, o processamento do recetor permite a libertação do domínio intracelular de Notch, que se transloca para o núcleo e regula programas transcricionais em conjunto com CSL/RBPJ e coativadores. Em tecidos de rato, o Notch3 está fortemente associado à biologia do músculo liso vascular/pericitos e contribui para a maturação dos vasos, a homeostase tecidular e respostas ao stress. A sinalização desregulada de Notch3 tem sido associada a estados de diferenciação aberrantes e patologia vascular, tornando-o um nó relevante para estudar a comunicação cruzada (crosstalk) da via Notch e o controlo de linhagem.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Notch 3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Notch3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Notch3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Notch3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Notch 3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Notch3 para a investigação da sinalização de Notch 3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Notch3 críticos para a função Notch 3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Notch3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Notch 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Notch 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Notch3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Notch 3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Notch 3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Notch3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Notch3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.