Plasmide CRISPR/Cas9 KO Notch 3 (m): sc-421933

Présentation

Notch3 code le récepteur Notch 3, une protéine transmembranaire à passage unique qui assure une signalisation juxtacrine permettant de contrôler, de manière dépendante du contexte, les décisions de destin cellulaire, la prolifération et la différenciation. Lors de la liaison au ligand, la maturation/protéolyse du récepteur permet la libération du domaine intracellulaire de Notch, qui se transloque au noyau et régule des programmes transcriptionnels avec CSL/RBPJ et des coactivateurs. Dans les tissus murins, Notch3 est fortement associé à la biologie des cellules musculaires lisses vasculaires et des péricytes, et contribue à la maturation des vaisseaux, à l’homéostasie tissulaire et aux réponses au stress. Une signalisation Notch3 dérégulée a été associée à des états de différenciation aberrants et à des pathologies vasculaires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les interactions (crosstalk) de la voie Notch et le contrôle des lignages.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Notch 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Notch3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Notch3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Notch3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Notch 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Notch3 pour l'étude de la signalisation de Notch 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Notch3 essentiels à la fonction de Notch 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Notch3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Notch 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Notch 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Notch3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Notch 3 plasmide HDR (m) et le Notch 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Notch3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Notch3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.