Particules Lentivirales d'Activation (m) NOS2/iNOS: sc-421928-LAC

Nos2 code la synthase inductible de l’oxyde nitrique (NOS2/iNOS), une enzyme qui produit de l’oxyde nitrique à partir de la L-arginine lors des réponses inflammatoires et de l’immunité innée. L’oxyde nitrique dérivé de l’iNOS module la signalisation redox, la défense antimicrobienne et les réseaux de cytokines, en interaction avec des programmes transcriptionnels régulés par NF-κB, JAK/STAT et les MAPK dans les macrophages et d’autres types cellulaires activés. Les variations d’activité de Nos2 sont couramment utilisées comme lecture mécanistique dans des modèles d’inflammation, d’infection et de stress oxydant, où l’oxyde nitrique et les espèces réactives de l’azote influencent le métabolisme cellulaire, la fonction mitochondriale et le remodelage tissulaire. Une signalisation iNOS dérégulée a été impliquée dans des systèmes expérimentaux pertinents pour l’auto-immunité, la neuroinflammation, les dysfonctions cardiovasculaires et la modulation immunitaire associée aux tumeurs.

Les particules d'activation lentivirales NOS2/iNOS (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Nos2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NOS2/iNOS (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Nos2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NOS2/iNOS. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Nos2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.