NOS2/iNOS Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400066-LAC

Il gene umano NOS2 codifica per la sintasi dell’ossido nitrico inducibile (iNOS), un enzima ad alta capacità che, in risposta a segnali infiammatori, converte la L-arginina in ossido nitrico e L-citrullina. NOS2/iNOS è regolato a livello trascrizionale a valle delle vie di segnalazione NF-κB, JAK/STAT e MAPK, integrando percorsi guidati da citochine e da pattern microbici per modulare l’immunità innata, l’equilibrio redox e le funzioni effettrici antimicrobiche. Un’attività prolungata di iNOS modula lo stress nitrosativo, la S-nitrosilazione delle proteine e la funzione mitocondriale, con effetti a valle su apoptosi, segnalazione angiogenica e rimodellamento della matrice extracellulare. Un’espressione deregolata di NOS2 è stata associata all’infiammazione cronica e alla biologia del microambiente tumorale, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici in immunologia, neuroinfiammazione e segnalazione correlata al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale NOS2/iNOS (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NOS2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NOS2/iNOS (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NOS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NOS2/iNOS. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NOS2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.