Plasmide CRISPR/Cas9 KO NOK (m): sc-433993

Présentation

La sérine/thréonine/tyrosine kinase 1 (Styk1), également connue sous le nom de NOK, code une protéine kinase de type récepteur impliquée dans la régulation de la signalisation répondant aux facteurs de croissance et du comportement des cellules épithéliales. Dans les modèles murins, NOK a été associée à la modulation des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant la prolifération, la survie et des phénotypes de transformation cellulaire. Une activité altérée de STYK1/NOK a été liée à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour les études mécanistiques de la biologie tumorale et du remodelage des réseaux pilotés par des kinases. Ces caractéristiques font de Styk1 un nœud utile pour disséquer le dialogue entre récepteurs kinases, les événements de phosphorylation en aval et les programmes de signalisation d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NOK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Styk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Styk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Styk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NOK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Styk1 pour l'étude de la signalisation de NOK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Styk1 essentiels à la fonction de NOK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Styk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NOK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NOK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Styk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NOK plasmide HDR (m) et le NOK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Styk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Styk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.