Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO NNT (m): sc-421922
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- NNT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique NNT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NNT Antibody (B-3): sc-390236
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO NNT (m) | sc-421922 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Nnt** code la **transhydrogénase des nucléotides nicotinamidiques (NNT)**, une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui couple la force proton-motrice au transfert d’un hydrure entre **NAD(H)** et **NADP(H)**. En générant du **NADPH mitochondrial**, NNT soutient les systèmes antioxydants dépendants du glutathion et de la thioredoxine et contribue au maintien de l’homéostasie rédox pendant la phosphorylation oxydative. L’activité de NNT influence le métabolisme mitochondrial, la gestion des espèces réactives de l’oxygène et la susceptibilité aux dysfonctionnements induits par le stress oxydant. Une altération de la fonction de **Nnt/NNT** a été associée à des phénotypes métaboliques et à des réponses au stress déficientes, ce qui en fait une cible pertinente pour les études de la bioénergétique mitochondriale et de la signalisation régulée par l’état rédox.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NNT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nnt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nnt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nnt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NNT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nnt pour l'étude de la signalisation de NNT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nnt essentiels à la fonction de NNT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nnt pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le NNT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NNT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nnt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le NNT plasmide HDR (m) et le NNT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nnt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nnt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.