NLP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406794

Descripción general

NINL codifica la proteína ninein-like (NLP), un factor asociado al centrosoma y a los microtúbulos que favorece la organización centrosomal, el anclaje de microtúbulos y la dinámica del citoesqueleto necesaria para el tráfico intracelular y la división celular. NLP está vinculada a la maduración del centrosoma y a procesos de nucleación/organización de microtúbulos que determinan la formación del huso y mantienen la estabilidad del genoma durante la mitosis. La alteración de la regulación del centrosoma y del huso es relevante para trastornos proliferativos y fenotipos de inestabilidad cromosómica, por lo que NINL es una diana útil para desentrañar vías que acoplan la función del centrosoma con la progresión del ciclo celular. En células humanas, los estudios sobre NINL también aportan información sobre los mecanismos de transporte dependiente de microtúbulos y la organización espacial de los orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NLP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NINL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NINL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NINL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NLP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NINL para la investigación de la señalización de NLP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NINL críticos para la función de NLP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NINL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NLP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NLP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NINL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NLP (h) y el plásmido HDR NLP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NINL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NINL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.