Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406906

Übersicht

NKX3-2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Nkx-3.2, ein nukleäres, DNA-bindendes Protein, das Entwicklungsprogramme der Genexpression reguliert, insbesondere solche, die die Chondrogenese und die Musterbildung des axialen Skeletts steuern. Nkx-3.2 beeinflusst die Festlegung von Zellschicksalen und die Differenzierung, indem es transkriptionelle Netzwerke koordiniert, die nachgeschaltet auf Morphogensignale reagieren, einschließlich Signalwegen, die mit BMP- und TGF-β-Familien-Signalen verknüpft sind. Eine veränderte NKX3-2-Aktivität wurde mit Defekten in der Knorpel- und Skelettentwicklung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext angeborener Skelettdysplasien sowie von Mechanismen der kraniofazialen Musterbildung untersucht. In zellbasierten Systemen stellt NKX3-2 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um die transkriptionelle Kontrolle der mesenchymalen Differenzierung und der Regulation von Genen der extrazellulären Matrix zu analysieren.

Das Nkx-3.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NKX3-2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NKX3-2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NKX3-2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nkx-3.2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NKX3-2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nkx-3.2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NKX3-2-Exone abzielen, die für die Nkx-3.2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NKX3-2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nkx-3.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Nkx-3.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NKX3-2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nkx-3.2 HDR-Plasmid (h) und Nkx-3.2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NKX3-2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NKX3-2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.