Plásmido Doble Nickase (h) Nkx-2.5: sc-400276-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Nkx-2.5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nkx-2.5 (h) y el plásmido de doble nickasa Nkx-2.5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NKX2-5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nkx-2.5 Anticuerpo (A-3): sc-376565
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Nkx-2.5 | sc-400276-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Nkx-2.5 | sc-400276-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NKX2-5 codifica Nkx-2.5, un factor de transcripción con homeobox que coordina la especificación del linaje cardiaco y la morfogénesis mediante la regulación de programas génicos que controlan la diferenciación de los cardiomiocitos, el desarrollo del sistema de conducción y la formación de las cavidades cardiacas. Actúa dentro de redes transcripcionales cardiacas centrales que incluyen factores GATA, proteínas TBX y MEF2 para modular la actividad de potenciadores (enhancers) y estados de cromatina dependientes del contexto durante la embriogénesis y en el miocardio adulto. La actividad desregulada de NKX2-5 o variantes en su secuencia se asocian con cardiopatías congénitas y fenotipos relacionados con arritmias, lo que lo convierte en un marcador ampliamente utilizado y en un nodo mecanístico para estudiar la cardiogénesis y los circuitos de regulación génica cardiaca. En modelos celulares, la transcripción dependiente de Nkx-2.5 influye en el ensamblaje del sarcómero, la maduración electrofisiológica y las vías de remodelado sensibles al estrés relevantes para la biología del desarrollo y de la enfermedad.
Nkx-2.5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NKX2-5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NKX2-5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NKX2-5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NKX2-5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.