Nkx-2.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406709

Descripción general

NKX2-3 codifica el factor de transcripción con homeodominio Nkx-2.3, un regulador de unión al ADN específico de secuencia implicado en el establecimiento de patrones del desarrollo y en decisiones sobre el destino celular. Es más conocido por sus funciones en tejidos derivados del endodermo, incluida la organogénesis intestinal y esplénica, donde ayuda a coordinar programas transcripcionales que dan forma a la arquitectura tisular. Nkx-2.3 influye en redes génicas que controlan la diferenciación epitelial, la identidad regional y funciones estromales asociadas al sistema inmunitario, lo que lo vincula a vías que regulan la homeostasis de la mucosa. Alteraciones genéticas y de expresión en NKX2-3 se han asociado con la susceptibilidad a la enfermedad inflamatoria intestinal y con la desregulación relacionada de las interacciones inmunitarias en el intestino, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la inflamación intestinal y la biología de la barrera.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NKX2-3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NKX2-3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NKX2-3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nkx-2.3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NKX2-3 para la investigación de la señalización de Nkx-2.3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NKX2-3 críticos para la función de Nkx-2.3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NKX2-3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nkx-2.3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nkx-2.3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NKX2-3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nkx-2.3 (h) y el plásmido HDR Nkx-2.3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NKX2-3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NKX2-3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.