Plásmido CRISPR de Activación (h) NKCC2: sc-401707-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) NKCC2 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) NKCC2 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR NKCC2 (h) y el plásmido de activación CRISPR NKCC2 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de SLC12A1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NKCC2 Anticuerpo (4H4): sc-293222
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) NKCC2 | sc-401707-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen humano SLC12A1 codifica NKCC2 (cotransportador sodio/potasio/cloruro 2), un transportador de membrana apical que media la captación electroneutra de Na⁺-K⁺-2Cl⁻ en células epiteliales, de forma más destacada en la rama ascendente gruesa del nefrón. Al acoplar el transporte de cloruro al flujo de sodio y potasio, NKCC2 favorece la reabsorción transepitelial de sal y contribuye al equilibrio osmótico y al manejo tubular de electrolitos. La actividad de NKCC2 se integra con programas de homeostasis iónica regulados por la señalización cAMP/PKA, las vías de quinasas WNK–SPAK/OSR1 y procesos de tráfico de membrana que ajustan la abundancia del transportador en la superficie celular. Las alteraciones de la función de SLC12A1/NKCC2 están implicadas en tubulopatías hereditarias con pérdida de sal y se estudian ampliamente en el contexto de la fisiología renal, los trastornos electrolíticos y los mecanismos de respuesta a los diuréticos.
NKCC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC12A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
NKCC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC12A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC12A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NKCC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC12A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NKCC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NKCC2 en células tumorales con expresión de SLC12A1 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.