Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401702-ACT

CHRNA5 kodiert die Alpha-5-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors, eine akzessorische Komponente heteromerer, ligandengesteuerter Kationenkanäle, die die Rezeptorassemblierung, die Ionenleitfähigkeit und die Desensibilisierungskinetik als Antwort auf Acetylcholin und Nikotin moduliert. Durch die Prägung der cholinergen Signalübertragung beeinflusst CHRNA5 die Membrandepolarisation, calciumabhängige Signalwege sowie nachgeschaltete Prozesse der neuronalen Erregbarkeit und der synaptischen Plastizität. Genetische Varianten und eine veränderte Expression von CHRNA5 wurden mit einer erhöhten Anfälligkeit für Nikotinabhängigkeit und rauchbezogene Merkmale in Verbindung gebracht und auch im Kontext der Lungenepithelbiologie sowie neuropsychiatrischer Phänotypen untersucht. Als regulatorische Untereinheit kann CHRNA5 Rezeptorantworten zelltypspezifisch feinabstimmen und ist daher relevant für mechanistische Studien cholinerger Schaltkreise und reizabhängiger Transkriptionsprogramme.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.