Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401605-NIC

CHRNA4 codifica la subunità α4 dei recettori nicotinici neuronali dell'acetilcolina (nAChR), che si assemblano come canali cationici pentamerici attivati da ligando, comunemente insieme a subunità β2 per formare recettori α4β2 ad alta affinità. In seguito al legame di acetilcolina o nicotina, questi recettori mediano l'ingresso di Na⁺ e Ca²⁺, regolando l'eccitabilità di membrana, la trasmissione sinaptica e la plasticità dipendente dall'attività nei circuiti colinergici. La segnalazione dipendente da CHRNA4 si interseca con vie calcio-dipendenti e con programmi di rilascio dei neurotrasmettitori che modellano l'attenzione, lo stato di arousal e la funzione delle reti neuronali legate alla ricompensa. Alterazioni genetiche e funzionali di CHRNA4 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neurologici, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione colinergica e sulla biologia dei recettori.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.