Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4: sc-401605-NIC

CHRNA4 code la sous-unité α4 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine (nAChR), qui s’assemblent en canaux cationiques pentamériques activés par un ligand, le plus souvent avec des sous-unités β2 pour former des récepteurs α4β2 à haute affinité. Après liaison de l’acétylcholine ou de la nicotine, ces récepteurs médiatisent l’entrée de Na⁺ et de Ca²⁺, régulant l’excitabilité membranaire, la transmission synaptique et la plasticité dépendante de l’activité au sein des circuits cholinergiques. La signalisation dépendante de CHRNA4 interfère avec des voies dépendantes du calcium et des programmes de libération de neurotransmetteurs qui façonnent le fonctionnement des réseaux neuronaux impliqués dans l’attention, l’éveil et la récompense. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de CHRNA4 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation cholinergique et de la biologie des récepteurs.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.