Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3: sc-401582-NIC

CHRNA3 code la sous-unité alpha 3 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine, un composant central des canaux cationiques activés par ligand qui assurent une neurotransmission cholinergique rapide. Lors de la liaison de l’acétylcholine ou de la nicotine, les récepteurs contenant CHRNA3 régulent la dépolarisation membranaire et l’influx de Ca²⁺, en se couplant à une signalisation intracellulaire qui influence l’excitabilité, la transmission synaptique et la sécrétion neuroendocrine. Dans les tissus humains, CHRNA3 est fortement exprimé dans les ganglions autonomes et contribue à des voies qui contrôlent les fonctions cardiovasculaire, gastro-intestinale et respiratoire. Des variations génétiques et une expression dérégulée au locus CHRNA3 ont été associées à la dépendance à la nicotine et à la susceptibilité aux maladies liées au tabagisme, ce qui étaye son intérêt pour des études mécanistiques de la signalisation cholinergique et de la biologie de l’addiction.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.